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牛臟器組織白細胞分離液試劑盒說明書

（細胞培養(yǎng)及分子生物學(xué)）

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

貨號：WBC1086P

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

名稱 產(chǎn)品編號 規(guī)格

A 牛臟器組織白細胞分離液 200ml

B 樣本稀釋液（贈品） 2010C1119 200ml

C 清洗液（贈品） 2010X1118 200ml

D F 液（贈品） F2013TBD 200ml

E 紅細胞裂解液（贈品） NH4CL2009 100ml

F 說明書 1 份

【實驗前準(zhǔn)備】

A． 適用儀器

zui大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機

B． 耗材

產(chǎn)品名稱 產(chǎn)品貨號 產(chǎn)地

15ml 離心管散裝 339650 美國 NUNC

15ml 離心管架裝 339651 美國 NUNC

50ml 離心管散裝 339652 美國 NUNC

50ml 離心管架裝 339653 美國 NUNC

無菌膠頭滴管或塑料滴管

【檢驗方法】

全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。

1. 首先制備組織單細胞懸液，制備方法詳見“組織單細胞懸液制備技術(shù)”。

2. 取一支 15ml 離心管，加入與制備的組織單細胞懸液等量的分離液（注：分離液zui少不得少于 5ml）。

3. 用吸管小心吸取制備的組織單細胞懸液加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min。（注：根據(jù)組織單細胞懸液樣本量確定離心條件，組織單細胞懸液量越大，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到*分離效果）。

4. 離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細胞層（一層或兩層），加入 10 ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞。250g，離心 10min。重復(fù)洗滌 2-3 次，即得所需白細胞。

5. 如有紅細胞殘留請使用紅細胞裂解液（產(chǎn)品編號：NH4CL2009）裂解紅細胞，具體操作方法詳見“紅細胞裂解液使用說明”。

【注意事項】

1. 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得*的實驗結(jié)果，在取樣 2h 內(nèi)進行實驗，樣品存放時間越長，細胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。

2. 本實驗不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。

3. 分離液用量大于制備的組織單細胞懸液樣本時，分離效果更佳。

4. 如實驗后細胞得率或活性過低，請上海研謹(jǐn)技術(shù)以尋求幫助。

【儲存條件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟

封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

【參考值（參考范圍）】

本實驗白細胞提取率及純度大于 80%。

下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進行參考。

紅細胞 白細胞 血小板

（4.0-10.0）×109

含量（個/L） （4.0-5.5）×1012 中性粒細胞 淋巴細胞 單核細胞 （1.0-3.0）×1011

50%-70% 20%-40% 3%-8%

【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

1. 組織單細胞懸液制備技術(shù)

2. 所獲得白細胞的培養(yǎng)技術(shù)。

3. 所獲得白細胞的核酸提取技術(shù)。

4. 所獲得白細胞的鑒定方法A.流式細胞技術(shù)

5. B.免疫組化技術(shù)

6. C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

注：上述技術(shù)方案詳情請登陸本公司搜索“細胞分離、

純化、擴增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊”，并在說明書項目欄下下載使用。

【可能存在的問題及解決方法】

1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況 出現(xiàn)原因 建議解決方案

離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細胞存在于分離液中 轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長

離心后白環(huán)層彌散 細胞密度過大 調(diào)整細胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見 細胞密度過小

2. 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時，恒定離心時間，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。

3. 本分離液依照標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級原料，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可

能出現(xiàn)紅細胞沉降不*的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

注：在對離心條件進行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達到*分離效果，

離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)。